产品简介

　　　鼠尾I型胶原蛋白（Collagen from rat tail, Type I）系采用Birkedal-Hansen方法在无菌下制备，纯度达到95%以上，可溶于0.006mol/L乙酸。本品可用于细胞培养皿的包被，特别适合普通细胞培养器皿不易贴壁细胞的培养；也可用于制备三维胶原凝胶，使细胞在模拟的三维环境中生长。

质量标准

1. SDS-PAGE分析纯度大于95%。
2. 无菌检验结果为阴性。
3. 本品2μg/cm2 包被细胞培养皿后培养PC-12细胞，贴壁及生长正常。
4. 本品浓度1mg/mL，pH7.0时形成具有一定强度的三维胶原凝胶，NIH-3T3细胞在三维凝胶内生长正常、PC-12细胞在三维凝胶表面生长正常。

使用方法

1. 细胞培养器皿的表面包被

　　以包被浓度为2μg/cm2为例，用无菌0.006mol/L乙酸将胶原蛋白稀释到0.012mg/mL。按下表体积加到相应的培养器皿中，确保胶原蛋白溶液铺满器皿的表面。开盖在超净台上过夜晾干，也可以在室温放置1小时后，用PBS洗3～4次后直接使用。包被好的器皿在4～25℃ 至少可保存三个月以上的时间。

1. 三维胶原凝胶的制备

A、无细胞三维胶原凝胶的制备（以配制1mg/mL三维胶1mL为例）

　　将200μL本品加到置于冰浴的离心管中，加入690μL双蒸水，然后加到12μL 0.1mol/L NaOH中（如果反过来把12μL 0.1mol/L NaOH加到胶原溶液中，会由于NaOH不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结），立即混匀。再加入100μL 10×PBS或10×培养液，混匀后立即加到培养器皿中（混匀后pH为7左右，如果PBS或培养液中没有加酚红，初次使用时需要测定pH值）。将培养器皿在室温放置20min待胶凝固后，转移到培养箱内。如果配制中使用的是10×PBS，使用前需要加入适当体积的细胞培养液预平衡。

B、含细胞三维胶原凝胶的制备（以配制1mg/mL三维胶1mL为例）

　　　准备好悬浮于培养液的细胞，并放置于冰浴中。将200μL本品加到12μL 0.1mol/L NaOH中（如果反过来把12μL 0.1mol/L NaOH加到胶原溶液中，会由于NaOH不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结），立即混匀。再加入23μL 10×PBS或10×培养液，混匀后立即加到培养器皿中（混匀后pH为7左右，如果PBS或培养液中没有加酚红，初次使用时需要测定pH值）。加入760μL的细胞悬浮液，混匀后立即加到培养器皿中。将培养器皿在室温放置20min待胶凝固后，加入适当体积的细胞培养液，转移到培养箱中培养。本品在室温下pH中性时可迅速成胶，在操作过程中要尽量保持低温。

保存条件

　　　4℃保存，切勿冻存，有效期一年。

参考文献

• Paul J.Price, 1975, Preparation and use of rat-tail collagen, Methods in Cell Science, 1(1):43-44;
• Birkedal-Hansen, H. Catabolism and turnover of collagens: Collagenase, Methods Enzymol, 1987, 144:140-171.